　　逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶yizhi劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴(kuò)增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第yi輪擴(kuò)增反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶yi制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴(kuò)增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第yi輪擴(kuò)增反應(yīng)。

　　3、PCR擴(kuò)增反應(yīng)（使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法）

　　PCR反應(yīng)需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴(kuò)增儀中，按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴(kuò)增。使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法。

　　4、擴(kuò)增產(chǎn)物定性分析

　　擴(kuò)增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較，判斷擴(kuò)增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有限制性內(nèi)切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴(kuò)增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測定。

　　5、結(jié)果判定和完成報告單

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